Каталог профилей
InvitroАнтинуклеарный фактор (АНФ, HEp-2, титры. Антинуклеарные антитела методом непрямой иммунофлюоресценции на препаратах HEp-2-клеток; ANA IF, titers)
Описание обследования
Метод определенияНепрямая иммунофлюоресценция на клетках перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с определением основных типов свечения ядра.
Исследуемый материал
Сыворотка крови
A12.06.057.000.03 (Номенклатура МЗ РФ, Приказ №804н)
Синонимы: Анализ кров на антинуклеарные антитела; Антиядерные антитела; АНА нРИФ; Antinuclear Antibodies; ANA indirect immunofluorescence assay IFA, HEp-2 Substrate; ANA-HEp2; Fluorescent AntiNuclear Antibody detection; FANA.
Краткое описание исследования «Антинуклеарный фактор»
Термин «антинуклеарный фактор» - традиционное обозначение результатов исследования антинуклеарных антител (АНА), полученных при использовании метода непрямой реакции иммунофлуоресценции на клеточных и тканевых субстратах (в современной модификации – преимущественно на препаратах клеток HEp-2).
Антинуклеарные антитела – семейство аутоантител, направленных против внутриклеточных антигенов собственных клеток организма. Исторически антитела этой группы, направленные против ядер клеток, были впервые выявлены в сыворотке больных системной красной волчанкой (СКВ), поначалу из их точных мишеней были известны только двухспиральная ДНК и гистоны, поэтому они получили общее название «антинуклеарные антитела».
«Золотым стандартом» исследования антинуклеарных антител и рекомендуемым скрининговым тестом при подозрении на системные аутоиммунные ревматические заболевания является метод непрямой иммунофлуоресценции на препаратах HEp-2-клеток с указанием типа свечения и титров выявленных антител. Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержат все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте основные виды антинуклеарных антител. Часть их имеет мишенью ДНК или связанные нуклеосомные белки, другие нацелены на РНК и рибонуклеопротеины, антигены ядерной оболочки или аппарата митотического веретена. Многие из рибонуклеопротеиновых мишеней могут находиться как в ядре клетки, так и в цитоплазме, а некоторые исключительно в цитоплазме, т. е. являются, по сути, не нуклеарными, а цитоплазматическими антигенами. Однако все эти антитела причисляют к антинуклеарным соответственно обозначению метода их исследования, при этом выявляемый данным методом спектр антител шире и объединяет антитела не только к ядерным, но и другим внутриклеточным аутоантигенам.
АНА - ценный лабораторный маркер различных аутоиммунных заболеваний. Хотя бы однократное обнаружение антинуклеарных антител методом непрямой флуоресценции на клетках HEp-2 (или эквивалентным тестом) у пациента является критерием включения при диагностике СКВ системной красной волчанки, согласно EULAR/ACR 2019. Специфические антинуклеарные антитела включены в классификационные критерии ряда других аутоиммунных заболеваний. При положительном результате АНФ вероятная клиническая значимость выявленного типа свечения учитывается в комплексе с клинической картиной, что позволяет планировать дальнейшее тестирование для определения специфичности антинуклеарных антител.
При системной красной волчанке и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т. е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Такие эндогенные нуклеопротеиновые аутоантигены могут образовываться в ходе процесса апоптоза эпителиальных клеток (каскада генетически запрограммированных реакций, приводящих к удалению поврежденной или дефектной клетки) и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций или лекарственных препаратов, происходящее одновременно с нарушенным или замедленным удалением продуктов апоптоза, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. Нуклеопротеиновые антигены конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител. В настоящее время описано около двухсот разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в сосудах микроциркуляторного русла, в том числе в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре.
В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в автоматизированных иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител. В свою очередь легкорастворимые компоненты ядра клетки могут утрачиваться из ядер клеток при фиксации препарата для проведения исследований антинуклеарного фактора методом непрямой иммунофлуоресценции. Поэтому использование ИФА-методов (см. тесты № 825, № 125) в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр-2 методом непрямой иммунофлуоресценции позволяет избежать ложноотрицательных результатов тестирования при скрининге системных ревматических заболеваниях.
С какой целью определяют Антинуклеарный фактор
Метод непрямой иммунофлуоресценции на клеточной линии НЕр-2 рекомендован в качестве «золотого стандарта» выявления антинуклеарных антител ведущими экспертами, включая европейские (EASI Group, 2010) и американские группы экспертов (ACR ANA Task Force, 2008).
При каких заболеваниях обнаруживают в крови Антинуклеарный фактор
Позитивность по антинуклеарному фактору на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке, системных ревматических и многих других аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным скрининговым тестом в обследовании больных с подозрением на системную аутоиммунную патологию. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как СКВ и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шёгрена. Выявление антинуклеарного фактора имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита.
Данные аутоантитела могут быть обнаружены при многих других аутоиммунных (тиреоидит, диабет, аутоиммунные заболевания печени), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваниях. Встречаемость антинуклеарного фактора достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет.
Литература
1. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению системной красной волчанки. – 2016.
2. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных с узловатой эритемой. – 2016.
3. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению болезни Шёгрена. – 2016.
4. Аутоантитела – лабораторные маркеры аутоиммунных заболеваний / Ю. И. Ярец, Н. И. Шевченко. – Гомель: ГУ «РНПЦ РМиЭЧ», 2017. – 59 с.
5. Бурлакова А. С. Основные маркеры аутоиммунных ревматических болезней и их интерпретация / А. С. Бурлакова, В. В. Василенко, Д. Л. Виноградов // Архивъ внутренней медицины. – 2016. – Т. 6. – № 5(31). – С. 5-11. – DOI 10.20514/2226-6704-2016-6-5-5-11.
6. Шенфельд И., Мерони П. Л., Чурилов Л. П. Руководство по аутоиммунным заболеваниям для врачей общей практики //СПб.: Медкнига-ЭЛБИ. – 2017.
7. Русскоязычная адаптация международной номенклатуры типов свечения ядра и цитоплазмы клетки (ICAP) для стандартизации выявления антинуклеарного фактора / О. Ю. Ткаченко, С. В. Лапин, А. В. Мазинг, А. А. Тотолян // Медицинская иммунология. – 2020. – Т. 22. – № 6. – С. 1195-1214. – DOI 10.15789/1563-0625-RVO-2067.
8. Agmon-Levin N. et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies //Annals of the rheumatic diseases. – 2014. – Т. 73. – №. 1. – С. 17-23.
9. Aringer M. et al. 2019 European League Against Rheumatism/American College of Rheumatology classification criteria for systemic lupus erythematosus //Arthritis & rheumatology. – 2019. – Т. 71. – №. 9. – С. 1400-1412.
10. von Mühlen C. A. et al. How to report the antinuclear antibodies (anti-cell antibodies) test on HEp-2 cells: guidelines from the ICAP initiative //Immunologic Research. – 2021. – Т. 69. – №. 6. – С. 594-608.
11. Инструкции к набору реагентов.
